Страница: 16/26
2Определение общей протеолитической активности 0
В кювету спектрофотометра вносили 0,03 мл цельной сыворотки
крови, 1,97 мл 0,05М трис НС1 буфера и 1,0 мл 1,5*10 5-3 0М БАЭЭ в
этом буфере, перемешивали. Оптическую плотность измеряли в те-
чении 30 мин. через каждые 10 мин при длине волны 253 нм против
раствора не содержащего сыворотку крови. Протеолитическую ак-
тивность выражали в МЕ/мл. (100)
2Оценка активности катепсина D 0
Определение количества кислоторастворимых продуктов фермент-
ного гидрролиза гемоглобина (6). Инкубационная смесь содержала
0,5 мл сыворотки крови, 0,5 мл 0,2М ацетатного буфера и 0,2 мл
0,3% раствора гемоглобина в ацетатном буфере. Продолжительность
инкубации60 мин. t=45 50 0 С. По окончании инкубации приливали 4 мл
3% ТХУ (трихлоруксусная кислота), замеряли при длине волны
280нм. Содержание катепсина Д выражается в условных единицах.
2Определение содержания альфа-1-АТ и альфа-2-МГ
Способ определения альфа-1-АТ и альфа-2-МГ в плазме (сыво-
ротке) крови основан на различном механизме взаимодействия их с
трипсином при использовании в качестве субстрата БАЭЭ (N-бензо-
ил-L-аргинин этиловый спирт)1. Альфа-1-АТ образует с трипсином
комплекс, неспособный гидролизовать комплекс БАЭЭ. Поэтому его
активность оценивается по торможению БАЭЭ-эстеразной активности
трипсина сывороткой крови.
В кюветах спектрофотометра готовили контрольную и опытную
пробы. Опытная проба содержала 1,9 мл 0,005 М трис НС1 буфера
(рн 8,0), 0,1 мл разведенной в 50 раз сыворотки крови и 0,1 мл
0,1% раствора трипсина. Контрольная проба содержала 2 мл 0,05 М
трис НС1 буфера (рн8,0) и 0,1мл 0,1% раствора трипсина. Инкуби-
ровали при t=25 50 0 5 мин и добавлялти по 1 мл 1,5мМ раствора БА-
ЭЭ. Быстро перемешивали и измеряли прирост оптической плотности
растворов при длине волны 253 нм против контроля.Отсчеты произ-
водили каждую минуту в течении 5 мин. При расчете активности
фермента использовали разность средних значений прироста актив-
ности за 1 мин. Активность альфа-1-АТ выражается в ИЕ/мл.
Альфа-2-МГ образует с трипсином комплекс, сохраняющий спо-
собность к гидролизу БАЭЭ с сывороткой крови и последующей
инактивацией несвязавшегося с альфа-2-МГ трипсина соевым инги-
битором трипсина (86). В кювету спектрофотометра вносили 1,75мл
0,05М трис НС1 буфера, рн 8,0, 0,1 мл разведенной в 10 раз сы-
воротки крови и 0,05МЛ 0,1% раствора трипсина .Инкубировали 5
мин при t=25 50 0С, добавляли0,1 мл 0,3% раствора ингибитора из бо-
бов сои, перемешивали и инкубировали 5 мин. Затем добавляли 1
мл 1,5 мМ раствора БАЭЭ, пробу перемешивали и измеряли прирост
оптической плотности при длине волны 253 нм через 2 мин в тече-
нии 10 мин против контрольной пробы, содержащей только реактивы
(2мл 0,05М трис НС1 буфера, рн8,0 и 1 мл 1,5мМ раствора БАЭЭ)
расчета активности фермента использовали среднее значение при-
роста оптической плотности за 1 мин. Активность альфа-2-МГ вы-
ражали в ИЕ/мл сыворотки крови.
3Оценка фагоцитарной активности 0
5(+ см. материал 1-2 лекции)
1Фагоцитарный индекс 0 - среднее количество частиц или микробов
в одном фагоците (норма 3-8).
1Фагоцитарное 0ч 1исло 0 - количество фагоцитов, участвующих в фа-
гоцитозе (норма 60-80%).
5Оценка показателей через разные промежутки времени позволяет
5оценить динамику фагоцитоза. В норме через 90 минут фагоцитар-
5ный индекс должен быть ниже, чем через 45 и 60 минут, в связи в
5перевариванием микробов. При нарушении переваривания он не ме-
5няется. /2551к/
_Переваривание микробов . можно оценивать путем посева лизатов
лейкоцитов на питательные среды и подсчета выросших колоний.
Метод предполагает использование в качестве объекта фагоцитоза
живых микроорганизмов. После инкубирования с микробами фагоциты
осаждают центрифугированием, омывают и лизируют. Их лизаты вы-
севают на твердую питательную среду. Переваривающую активность
фагоцитов оценивают по числу выросших колоний. /2551к/
_Метаболическую активность фагоцитов . определяют после окраски
их 0,25% раствором нитросинего тетразолия. В норме метахрома-
тично (диффузно и в виде глыбок голубого цвета) окрашивается
15-18% нейтрофилов, при инфекциях их число увеличивается до 40%
и более. /2551к/
Показатели фагоцитоза снижаются при иммунодефицитах, повыша-
ются при благоприятном течении инфекции. /2551к/
2Оценка комплементарной активности
1) 3Общая гемолитическая активность комплемента 0 должна быть
100 _+ .20% от уровня здоровых доноров.
Степень гемолиза можно определить фотометрически (с помощью
нефелометра, спектрофотометра, фотоколориметра) или визуально
путем сравнения интенсивности гемолиза в опытных пробирках со
стандартной шкалой лизированных эритроцитов. /2551к/
2) Уровень отдельных компонентов 4 можно оценить по реагентам
4(R) по степени компенсации отсутствующего в них белка при до-
4бавлении сыворотки больных. (R1 - cыворотка с дефицитом компо-
4нента С1, 0
4R2 - сыворотка с дефицитом компонента С2,
4R3 - - " - С3,
4R4 - - " - С4 и т.д.)
_В сыворотке крови
С1q - 190 мг/л,
С1s - 120
С2 - 30
С4 - 430
С3 -1300
С5 - 75
С6 - 60
С7 - 55
С8 - 60
С9 - 160
ф. Р - 25
ф. В - 240
С1-In - 180 мг/л. /2551к/
3) Выявление отдельных продуктов активации - С5а (по степени
агрегации лейкоцитов), С4а, С3а, С3в, С2в-кинина и др.
4) Определение комплемент-связывающих рецепторов на лейкоци-
тах (CR1, CR2, CR3). /2551к/
2ОБЩАЯ ИММУНОГРАММА 0
2┌─────── Специфическая защита ───────┐
│ │
Гуморальная Клеточная
- АТ - Тк
5Различают следующие степени иммунитета:
51. полная восприимчивость инфекции (100% гибель);
52. Слабый иммунитет;
53. умеренный иммунитет;
54. сильный иммунитет (летальных случаев нет);
55. полный иммунитет (абсолютная резистентность)./261/66/
5Широкая вариабельность показателей иммунитета, изменчивость
5в течение года не всегда позволяет полно оценить картину систе-
5мы иммунитета. /1677к/
5Вторичный ИО на экзогенные АГ не отражает состояния иммунной
5системы. Для оценки иммунного статуса необходима информация о
5первичных гуморальных или клеточных реакциях на антиген.
5/7576/84/
2НОРМАЛЬНАЯ ИММУНОГРАММА
2Общее количество лейкоцитов - 4-9 0 2тыс./мкл
5Подсчет в камере Горяева (25 больших квадратов)
5N х 4000 х 20 (разведение) N х 1000
5L = ──────────────────────────────── = ─────────── = N х 200
525 х 16 5
N должно быть от 20 (4 тыс.) до 40 (8 тыс.).
2Лейкоцитарная формула: 0 Размер
Нейтрофилов - 50-60% 10-12 мк
Эозинофилов - 3-5 12-17 мк
Базофилов - 0,5-1 10-12 мк
Моноцитов - 5-8 12-15 мк (тканевые - больше)
Лимфоцитов - 25-35% 7-8 мк малые; около 12 мк - большие
(тканевые лимфоциты - еще больше)
Эритроциты - 7 _+ .0,5 мк
Тромбоциты - 2(-4) мк
[ 5ПОЛ на стекле --- лимфоцитоз 0]
5Лимфоцитов от 25% (т.е. от 1000 до 2250 мкл-1)
5до 35% (т.е. от 1200 до 3000 мкл-1).
5Подсчет абсолютного количества лимфоцитов у больного:
5Например, общее количество лейкоцитов - 5 тыс/мкл,
5количество лимфоцитов в лейкоцитарной формуле - 20%
5(=относительное количество лимфоцитов);
5Абсолютное количество - 20% от 5 тыс, т.е. 1 тысяча
5в 1 мкл. Вывод: меньше нормы.
Количество лимфоцитов - 1800-3200 мкл 5-1 0, (800-3600 в мкл);
- 25-35% (20-26% /2551к/) всех лейкоци-
тов.
_В крови В-лимфоцитов - 15% . /2338к/94/ (15-25%); CD19+, CD22+,
CD72 5+ 0-клетки - 10-15% (В-клетки);
(CD72+ -клетки - 30-35%) - ???
_Т-лимфоцитов - 60% ., из них Тх - 20% 1 0(CD4 5+ 0-клетки-36-42%)
Тs - 12% (CD8 5+ 0-клетки-28-35%
= Тs + Тк)
CD3 5+ 0-клетки - 55-70% (общие Т-лимфоциты)
_О-лимфоцитов - 25% . /2338к/94/, (10%)
_Т-лимфоциты .:
- CD 3 - 600-2500 (1000-1400) мкл 5-1 0 (в среднем 1400);
- в тесте розеткообразующих клеток (Е-РОК) Т 4общие 0 (=То) -
50-60 (50-70%, 40-90)% от общего количества лимфоцитов;
- CD2+, CD3+ - 70-85% /2551к/98/
- Та-лимфоциты (Т 4активные 0=Та) - 700-1100 мкл 5-1 0 или 25-35%;
Для выявления активированных Т-лимфоцитов определяют рецеп-
тор к ИЛ-2 (CD25), HLA DR-антигены и CD 71 (рецептор для
трансферрина).
_Тх-лимфоциты . (CD4+) - 700-1100 мкл 5-1 0 (930);
- Теофиллин-резистентные Е-РОК (Тх) - 50-63%.
- CD4+ - 35-48% /2551к/98/
При снижении Тх до 200 - СПИД прогрессирует;
< 150 - присоединение вторичной инфекции (сепсис).
_Тs-лимфоциты . (CD 8+) - 300-500 мкл 5-1 0 (500);
Реферат опубликован: 7/04/2005 (67728 прочтено)