Страница: 15/26
Трансферрин │3030 7+ 0350 мкг/мл│
Церулоплазмин │260 7+ 030 мкг/мл │
│0,3-0,6 г/л │ 1-2 г/л
альфа-2-макроглобулин│2150 7+ 0150 мкг/мл│
│(500-2500 мг/л)│
альфа-1-антитрипсин │2200 7+ 0200 мкг/мл│
─────────────────────┼───────────────┼─────────────────────────
4альфа-1-антипротеаз- │2,5-4,0 г/л │ 5-7 г/л
4ный ингибитор /???/ │ │ -?
2Оценка ПОЛ
2Определение активности каталазы 0. Активность каталазы опреде-
ляли в гемолизатах крови на основе способности перекиси водоро-
да образовывать окрашенных комплекс с молибдатом аммония. Инку-
бационная смесь объемом 2 мл содержала 0,03% Н 42 0О 42 0. Реакцию ини-
циировали внесением 0,1 мл гемолизата в разведении 1:1000. Про-
должительность инкубации - 10 минут. Температура 25 градусов.
По окончании инкубации приливали 1 мл 4% молибдата аммония и
измеряли поглощение при длине волны 410 нм. Для расчета актив-
ности фермента использовали коэффициент мольной экстинции цвет-
ного комплекса Н 42 0О 42 0 и молибдата аммония - 10 52 0 М 5-1 0см 5-1 0. Актив-
ность каталазы выражали в ммолях Н 42 0О 42 0 с 5-1 0л 5-1 0.
2Определение содержани МДА 0. МДА определяли в цельной крови по
цветной реакции с ТБК (Бородин Е.А.,Арчаков А.И.,1987). К 1 мл
образца добавляли 1 мл 30% ТХУ и центрифугировали при 3000
об./мин. в течение 10 минут. К надосадку приливали 1 мл 0,8%
ТБК и ставили на кипящую водяную баню на 15 минут. По окончанию
инкубации пробирки охлаждали, приливали 1 мл хлороформа и цент-
рифугировали при 3000 об./мин. в течение 5 минут для удаления
мутости. Верхнюю окраенную фазу осторожно переносили в кювету и
измеряли светопоглощение при 532 нм. При расчете содержания МДА
в пробе использовали коэффициент мольной экстинции 1,56х10 5-5
М 5-1 0см 5-1 0. Содержание МДА выражали в наномолях на 1 мл крови.
2Определение диеновых конъюгатов 0. 0,1 мл спиртового раствора
липидов вноили в кювету спектрофотометра СФ-16, в которой нахо-
дились 2,9 мл абсолютного спирта. Оптическую плотность измеряли
при длине волны 233 нм с ходом луча 10 мм. Для перерасчета ис-
пользовали коэффициетн мольной экстинции 2,2х10 5-5 0 М 5-1 0см 5-1
(Стальная И.Д.,1977). Величину диеновых конъюгатов выражали в
наномолях на 1 мл крови.
2Определение гидроперекисей липидов 0. Количество гидропереки-
сей липидов определяли на основе их способности окислять ионы
Fe 52+ 0c последующей реакцией на Fe 53+ 0 с тиоцианатом аммония (Ро-
манова Л.А., Стальная И.Д.,1977 в модификации Е.А.Бородина).
Для расчета содержания гидроперекисей использовали коэффициент
мольной экстинции образующегося цветного комплекса Fe[Fe(CNS)] 46
при 490 нм 1,1х10 55 0М 5-1 0см 5-1 0, а в расчете на ион Fe 53+ 0 0,55х10 55
М 5-1 0см 5-1 0 (Бородин Е.А. и соавт.,1992). Величину гидроперекисей
выражали в наномолях на мл крови.
2Определение окисляемости сыворотки крови 0. Окисляемость сыво-
ротки крови изучали по степени накопления МДА при индукции Fe 52+
аскорбат-зависимого или НАДФН-зависимого ПОЛ в инкубационной
смеси объемом 1 мл, содержащей 12 мкМ Fe 52+ 0; 0,8 мМ аскорбат
(или 1 мМ НАДФН); 0,2 мМ пирофосфат натрия; 50 мМ трис-НСl бу-
фер, рН 7,4; 0,1 мл сыворотки крови и выражали в наномолях МДА
мин 5-1 0мл 5-1 0 сыворотки крови.
2Определение антиокислительной 0(антиоксидантной) 2активности
2(АОА) крови 0. АОА сыворотки крови оценивали в условиях in vitro
по их способности тормозить аскорбат (НАДФН)-зависимое ПОЛ в
суспензии микросом (М.А.Штарберг,1996) и выражали в процентах.
Опытная инкубационная смесь объемом 1 мл содержала 0,8 мМ ас-
корбат (или 1 мМ НАДФН); 0,2 мМ пирофосфат натрия; 50 мМ
трис-НCl буфер, рН 7,4; 0,5 мг фосфолипида микросом, 0,1 мл сы-
воротки крови. ПОЛ инициировали внесением ионов 5 0Fe 52+ 0 в конечной
концентрации 12 мкМ. Контрольная проба аналогичного состава не
содержала сыворотки крови. АОА рассчитывали по формуле:
МДА 5 4контроль 0- МДА 4 опыт
АОА = ──────────────────────── 4─ 0 х 100%.
МДА 4 контроль
2Определение токсигенной зернистости нейтрофилов 0. Токсигенную
зернистость изучали с иммерсионной системой микроскопа в препа-
ратах крови, окрашенных по Паппенгейму, Нохту. В сравнении с
нейтрофильной зернистостью нормальных лейкоцитов она более
крупная и интенсивнее окрашивается. Учет ведут суъектвино по
количеству гранул, их размерам и интенсивности окраски: (-) или
(+) (Ронин В.С., Старобинец Г.М.,1989).
2Парамецийный тест 0.
Сущность методы оценки токсичности биологических жидкостей с
парамецийным тестом (Пафомова Г.А. и соавт. /1980/ с добавлени-
ем условий по Нифантьеву О.Е. и соавт. /1988/) заключается в
измерении времени жизнеспособности парамеций (инфузорий) - "па-
рамецийного времени" в присутствии токсического фактора, нахо-
дящегося в биологической жидкости. В качестве контроля опреде-
ляли время выживаемости инфузорий в присутствии плазмы или сы-
воротки крови здоровых людей. 0,01 мл исследуемой биологической
жидкости и столько же взвеси, содержащей от 8 до 10 парамеций,
тщательно перемешивали и под увеличением объектива в 25 раз оп-
ределяли время полной гибели парамеций. Образец исследовали 3
раза и использовали средние данные. С целью повышения точности
способа использовали 11-15-суточную культуру парамеций.
_Проверка дефицита Se в организме .: кончики пальцев рук проте-
реть спиртом, затем 7,5% Н 42 0О 42 0. Если кожа побелеет, то дефицит.
/со слов проф. М.А.Джулай/
2Определение бактерицидной активности
2сыворотки (БАС)
(= комплемент, + лизоцим, + катионные белки)
В пробирки с 2,5 мл стерильного бульона Кольбака добавляют
по 0,5мл испытуемой сыворотки. Затем микропипеткой во все про-
бирки вносятпо 0,1 мл 24-часовой бульонной культуры кишечной
палочки. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и отбирают
1,5 мл для нефелометрического измерения оптической плотности.
Смесь, оставшуюся в пробирках, помещают в термостат при 37 50 0С на
3 часа. (Расчет бактерицидной активности в процентах произво-
дится по ниже описанной формуле.) Таким образом, удается снять
2 показателя: первый - характеризующий исходную оптическую
плотность бульона с культурой и сывороткой сразу после смеше-
ния, и второй - регистрирующий оптическую плотность той же сме-
си после 3-часовой инкубации смеси в термостате.
(Д опыта через 3 часа - Д опыта сразу) х 100
───────────────────────────────────────────── =
(Д контроля через 3 часа - Д контроля сразу)
(0,18 -0,163) х 100
= ──────────────────── = 7,8%
0,312 - 0,095
2Биологический метод - парамецийный тест
Сущность метода заключается в измерении времени жизнеспособ-
ности парамеций (инфузорий) -"парамецийного времени" в присутс-
твии токсического фактора, находящегося в биологической жидкос-
ти. В качестве контроля определяют время выживаемости инфузорий
в присутствии плазмы или сыворотки крови здоровых людей. 0,01
мл исследуемой биологической жидкости и столько же взвеси, со-
держащей от 8 до 10 парамеций, тщательно перемешивают и под
увеличением объектива в 25 раз определяют время полной гибели
парамеций.Образец исследуют 3 раза и расчитывают средние дан-
ные. С целью повышения точности способа используют 11-15 суточ-
ную культуру парамеций. время жизнеспособности парамеций при
добавлении к их культуре биологической жидкости здоровых людей
составляет 25-30 минут (106,137,47-ЛИИ - лейкоцитарный индекс
интоксикации)
2Определение содержания МСМ в сыворотке крови, лимфе
(молекулы средней массы)
Принцип метода основан на осаждении белков исследуемой жид-
кости 10% р-ром ТХУ с последующим центрифугированием при 3000
об/мин в течении20 мин. и определением поглощения супернатанта,
в 10 раз разведенного дистиллированной водой, (при длине волны
280 нм) против воды. Сдержание МСМ выражают в условных едини-
цах, соответствующих величине оптической плотности разведенного
супернатанта. В норме количество МСМ составляет 0,260,280 ус-
ловных единиц (24, 102)
Реферат опубликован: 7/04/2005 (67750 прочтено)