Серологические реакции

Страница: 2/8

5стрептококки)

5- наличие перекрестных антигенов

б) 2Прямая реакция гемагглютинации (РГА)

- вирусами (эритроцитов любого вида животного)

- при смешивании двух разногруппных проб крови (определе-

ние групп крови)

1Постановка реакции:

│Субстанция, склеивающая эритроциты (сыворотка, вирусы)

│+ эритроциты --- хлопья

1Результат: 0 - хлопья (означают присутствие АТ)

1Варианты постановки:

- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле)

- _Развернутая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для

раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)

5Материал с вирусом титруют от 1/10 до 1/1280. 0,5мл данного

5материала смешивают с 0,5мл 1-2% эритроцитов. Инкубируют 30 ми-

5нут при 37оС или 45 минут при комнатной температуре. Титром ви-

5руса считается его наибольшее разведение, при котором наблюда-

5ется агглютинация эритроцитов.

5Прямая гемагглютинация, вызываемая бактериями, коррелирует с

5их способностью прикрепляться к клеткам макроорганизма, отража-

5ет вирулентные свойства. (Предложен метод селекции наиболее ак-

5тивных клеток из культуры путем их адсорбции на эритроцитах с

5последующим высевом на плотные среды.)-[11ц301-81]

2) _ 2Непрямая РА

= 2РНГА (РПГА 0; РНГА=РПГА 2) (реакция пассивной 0 2или 0 2непрямой ге-

2магглютинации)

1Варианты постановки:

- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле)

- _Развернумая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для

раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)

┌ ┐

│ .0. .0. │

│\ / \ / \ /│

│ │ │ │ │

└ ┘n

К носителю (эритроцитам, стафилококку, частицам латекса /ла-

текс-агглютинация/ и пр. химическим способом "пришивают" анти-

гены, ампулируют и выпускают в биотехнологической промышленнос-

ти как диагностикумы.

1Постановка реакции:

│Сыворотка больного --- раститровка

│+ диагностикум в каждую лунку ---

1Результат: 0 - "зонтик" (реакция агглютинации есть),

- "пуговка" (РА нет)

Последняя ячейка с положительной пробой ("зонтиком") означа-

ет титр АТ.

5Сорбция на носителе либо АГ (РНГА=РПГА), либо АТ (обратная

5РПГА).

5Реакция ставится в двух вариантах. Антиген (РПГА) или анти-

5тела (РНГА) связываются с крупным носителем с последующим выяв-

5лением уровня специфических иммуноглобулинов или антигена.

5Исследуемый антиген "сшивается" танином или глютаровым ди-

5альдегидом с эритроцитами или частицами латекса.

5Сыворотка больного, прогретая 30 минут при 56оС, раститровы-

5вается (0,5мл) и смешивается с 2 каплями эритроцитарного диаг-

5ностикума.

3) _ 2Проба Кумбса . 0 (непрямая пассивная гемагглютинация;

антиглобулиновый тест)

Для постановки этой реакции необходима антиглобулиновая сы-

воротка, которую получают путем иммунизации кролика иммуногло-

булинами человека.

Используется для определения неполных (функционально однова-

лентных) антител, например, "ро"-антител к эритроцитам плода

при резус-конфликте, ряд аутоантител, АТ к некоторым микробам и

пр. Эритроциты плода в условиях in vivo не агглютинируют, одна-

ко при обработке их in vitro антисывороткой к гамма-фракции ан-

тител человека происходит РА на стекле (= _ориентировочная . реак-

ция Кумбса). К сыворотке добавляется антиген (резус-фактор) и

затем антисыворотка против гамма-глобулинов, что вызовет агглю-

тинацию загруженных эритроцитов. _Развернутая . реакция Кумбса (в

ряду пробирок или лунок) применяется для определения титра цир-

кулирующих неполных антител в сыворотке больного.

┌ ┐

│ 0 0 │

│ \ / \ / \ / \ / -АТ 41 0│

│ │ │ │ │ │

│ \ / \ / \ / │

│ │ │ │ │

│ АТ 42 0 АТ 42 0 АТ 42 0 │

└ ┘n

1Постановка реакции:

│Сыворотка (АТ 41 0) --- раститровка

│+ эритроциты (с Rh-антигеном)

│+ антисыворотка к Fc-фрагменту Ig G (АТ 42 0).

1Результат: 0 - "зонтик" (реакция агглютинации есть),

- "пуговка" (РА нет)

Последняя ячейка с положительной пробой ("зонтиком") означа-

ет титр АТ.

4) _ 2Реакция коагглютинации 0 2(РКОА 0, РКА 2)

1Варианты постановки:

- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле) --- хлопья

- _Развернумая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для

раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)

L[+]

┌ │ ┐

│ ┌─┴─┐ 4 0 │

│ 0> 4── 0┤St.├ 4─ 0─<0│

│ └─┬─┘ 4 0 │

│ │ │

└ ┘n

К носителю - клеткам инактивированного золотистого стафило-

кокка (Staphylococcus aureus), несущего на своей поверхности

белок А (функциональный аналог FcR) добавляют необходимые АТ

(антисыворотку) и после инкубации - исследуемую жидкость с

предполагаемыми АГ-ми.

1Постановка реакции:

│Стафилококковый диагностикум

│+ АГ

1Результат: 0 - "зонтик" (реакция агглютинации есть),

- "пуговка" (РА нет)

Последняя ячейка с положительной пробой ("зонтиком") означа-

ет титр АТ.

5Реакция Ко-агглютинации (РКА) предложена в 1973г. Kronvall

5для постановки диагноза пневмококковой инфекции. Сейчас она ис-

5пользуется для диагностики эшерихиозов, коклюша, менингококко-

5вой, стрептококковой инфекции, сальмонеллезов и шигеллезов, а

5также для обнаружения некоторых бактериальных токсинов.

5/2119к/85/

5Реакция пригодна для идентификации различных антигенов путем

5агглютинации стафилококков, сенсибилизированных антителами про-

5тив детерминант бактериальной, вирусной или неинфекционной при-

5роды. /2111к/

5Например, для индикации шигелл зонне в молоке, кефире и в

5материалах от людей. Для определения чувствитель-

5ности РКОА ставили с 10-кратными разведениями 1 млрд. микробной

5взвеси шигелл Зонне. Чувствительность РКОА составила 108-109

5микробных тел в 1 мл взвеси. /2111к/

5Стафилококковый реагент выпускается Ленинградским НИИЭМ им.

5Пастера и используется его 2% взвесь. Для сенсибилизации ис-

5пользуются сыворотки с титром антител в РПГА не ниже 1:12800.

5/2111к/

5На предметное стекло капают 2 капли по 0,1 мл диагностикума

5и испытуемый материал. Положительным результатом считалось об-

5разование агглютината с полным просветлением смеси. (Контроль -

5с физраствором и реакция с заведомо инфицированным материалом.)

4Определение энтеротоксина в реакции

4коагглютинации

4Культуру сальмонелл осаждают (8000 об./мин.;20 минут), к

4осадку микробов добавляют 0,5 мл дистиллированной воды, готовят

4лизат, вновь центрифугируют (8000 об./мин.;20 минут) и с надо-

4садком (супернатантом) проводят реакцию. /1804к/88/

4В реакции используют диагностикум - золотистый стафилококк с

4"пришитыми" к нему антителами к токсину. 2-3 капли реагента + 1

4капля супернатанта культуры сальмонелл больного --- РА (оценка

4+, ++, +++, ++++ после 3-минутного покачивания). /1804к/88/

5) _ 2РТГА (реакция торможения гемагглютинации)

Гемагглютинин (НА) вирусов заблокирован антителами (первые

ячейки с " _пуговками ." = РА нет):

L[+]

┌ ┐

│ ┌───┐ ┌───┐ │

│ ──<0>── │Эр.│ ──<0>── │Эр.│ ──<0>── │

│ └───┘ 7 0 └───┘ │агглютинации

└ ┘эритроцитов

нет

0 - вирус (=торможение

>── - антитела агглютинации)

При "следовых" количествах антител к гемагглютитину (НА) или

их отсутствии гемагглютинин ("клей для эритроцитов") вирусов

остается "открытым" (не закрыт антителами) и происходит склеи-

вание эритроцитов (последние ячейки с " _зонтиками ." = РА есть):

L[+]

┌ ┐

│ ┌───┐ ┌───┐ │

│0│Эр.│0│Эр.│0│

│ └───┘ └───┘ │

└ ┘n

а) Определение титра АТ к определенному вирусу (добавляется

антисыворотка к НА /гемагглютинин видоспецифичен/ данного виру-

са).

1Постановка реакции:

│Сыворотка больного --- раститровка

│+ суспензия музейных инактивированных вирусов

│ (или диагностикум)

│+ эритроциты любого вида животного

Реферат опубликован: 15/06/2005 (23202 прочтено)