Страница: 1/8
СЕРОЛОГИЯ - раздел иммунологии, изучающий взаимодействие АГ
и АТ в пробирочных реакциях (in vitro).
Серологические реакции - реакции с использованием АГ или АТ
(проводящиеся in vitro).
Серологическими методами (в диагностике инфекционных заболе-
ваний) называют совокупность пробирочных реакций, основанных на
АГ-АТ-взаимодействии. /2640к/99/
1) Направленны на выявление в сыворотке крови и других жид-
костях организма АТ к АГ возбудителей инфекционных болезней.
2) Проброчные реакции, имеющие целью обнаружение в сыворотке
крови и других субстратах растворимых микробных АГ с помощью
стандартных иммунных сывороток.
Серологические реакции проводятся с использованием
1) АГ для поиска АТ
2) АТ для поиска АГ
4+ 0 /?/ 4 IN VIVO (кожные пробы, РН in vivo ...)
4- серопрофилактика (введение АГ, АТ)
4В серологчиеские методы не входят реакции, которые ставят на
4людях или животных (реакция Шика, Дика), и серологическая иден-
4тификация культур микроорганизмов (это один из этапов бактерио-
4логического метода.
КЛАССИФИКАЦИЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ
1. Двухкомпонентные
- простые (РА,РП)
-- розеточные тесты (РОК)
-- цитофлюоресцентные методы
- сложные (РН /гемадсорбции, токсина, ...,РТГА,РНГА, ре-
акция прямой имунофлюоресценции, реакции адгезии).
Реакции адгезии отличаются взаимодействием частиц, например,
клетки, с серологически активной поверхностью, в т.ч. с другой
клеткой. /2260к/
2. Трехкомпонентные
- простые
-- реакция бактериолиза,
-- реакция коагглютинации
- сложные
-- реакция непрямой иммунофлюоресценции,
-- РИА,
-- РЭМА,
-- литические тесты (РСК, определение АОК с помощью
эритроцитарных АГ-ов),
-- использование электронного парамагнитного и ядер-
но-магнитного резонанса) /7271/87/,
Материал для серологических реакций:
- сыворотка крови (парные сыворотки). Заморозка в течение
10-14 дней.
- ликвор,
- моча,
- фильтрат испражнений,
- промывные воды бронхов, полости рта, глотки, носа /2640к/,
желудка.
- Слизь (шейки матки, ... - здесь АТ порой больше, чем вы сы-
воротке)
Учет серологических реакций осуществляется видуально, иногда
с помощью лупы и редко - микроскопа. /2640к/99/
При оценке серологических реакций применяют 3 главных крите-
рия /2640к/99/:
- наличие и интенсивность реакции (в плюсах и др.),
- диагностический титр, заранее отработанный для всех забо-
леваний,
- нарастание титра АТ в течение болезни в 4 и более раза.
В процессе оценки серологических реакций часто возникает не-
обходимость дифференцировки
1) специфической реакции (на видовые и типовые антигены) от
группоспецифической (на межвидовые АГ) [Группоспец. АГ
Salm. - табл.]
4-- дифференцировка по моноспецифическим антисывороткам,
4-- по скорости нарастания титра АТ, которая выше к специ-
4фическим АГ, 0
4-- по реакции адсорбции АТ избытком антигена
4-- по легкости диссоциации ИК под влиянием диссоцирующих
4факторов 0
2) ИО на текущую инфекцию от ИО на перенесенное ранее заболе-
вание и иммунизацию. /2640к/99/
5-- Оценивают по темпу нарастания АТ.
При постановке любой серологической реакции параллельно с
опытом ставятся _контроли на каждый компонент реакции .:
- микробная культура не должна образовывать хлопья при ана-
логичном встряхивании;
- сыворотка и антисыворотка не должны быть с хлопьями
(хлопья появляются в процессе хранения белков в связи с посте-
пенным оголением углеводных компонентов; углеводные компоненты
белков, будучи жесткими разветвленными структурами, "запутыва-
ются друг в друге", обуславливая агрегацию белков);
- эритроциты не должны быть лизированы;
- сыворотка морской свинки, используемая как источник комп-
лемента, должна лизировать эритроциты (т.е. работать): компле-
мент + ЭБ --- лизис;
- диагностикум не должен содержать хлопьев и пр.
- при поиске АГ обязательно используется параллельно музей-
ный АГ, который должен однозначно выявляться при проведении ме-
тодики (это значит, что все компоненты реакции "работают", ме-
тодика поставлена правильно).
3РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ /РА/
РА - реакции склеивания микробов, частиц латекса или эрит-
роцитов /реакция гемагглютинации - РГА/. АГ-несущие частицы
склеиваются антителами и выпадают в видимый осадок.
1Титром сыворотки 0 считают максимальное разведение, дающее
агглютинацию АГ.
┌ ┐
0 0 0 0 0 = │ 0 0 │
\ / \ / \ / \ / \ / \ / │\ / \ / \ /│
│ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
└ ┘n
0 - клетка
>── - молекула антитела
1) _ 2Прямая РА
В этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглю-
тинируют корпускулярные АГ (агглютиногены).
- 1Зернистая 0 агглютинация происходит при склеивании микробов,
содержащих О-антиген.
- 1Хлопьевидная 0 агглютинация происходит с бактериями, имеющи-
ми жгутики (Н-антигены).
а) 2Прямая реакция агглютинации (РА)
- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле)
1Постановка реакции:
│Микробная суспензия
│+ антисыворотка к микробу
1Результат: 0 - хлопья (агглютинаты)
5Для определения микробного вида (серотипирования) на пред-
5метное стекло наносится 1 капля (0,05мл) диагностической сыво-
5ротки, разведенной физиологическим раствором 1:25. На вторую
5половину стекла наносится капля физиологического раствора
5(контроль). К каждой капле добавляется равный объем испытуемой
5культуры.Слегка покачивая стекло, наблюдать за течением реак-
5ции: феномен агглютинации проявляется выпадением хлопьев и
5просветлением жидкости в капле. В контроле микробная культура
5должна остаться мутной и гомогенной. 0
- _Развернутая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для
раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)
1Постановка реакции:
│Сыворотка больного, содержащая АТ к микробу --- рас-
│ титровка
│+ микробная суспензия (равное количество во все про-
│ бирки или лунки
1Результат: 0 - хлопья (агглютинаты) микробов
5Для определения антител в сыворотке крови больного поста-
5вить в штатив 7 пробирок и налить в каждую из них по 0,5 мл фи-
5зиологического раствора. Добавить в первую пробирку 0,5 мл сы-
5воротки больного, разведенную в 50 раз, перемешать. 0,5 мл из
5первой пробирки перелить во вторую, перемешать; из второй про-
5бирки 0,5 мл перелить в третью и т.д. Из последней пробирки вы-
5лить для равенства объемов 0,5 мл в банку с дезраствором.В каж-
5дую пробирку добавляют по 2 капли антигена или диагностикума.
5Оформить 2 контроля - контроль антигена (для исключения спон-
5танной агглютинации) и контроль сыворотки в исходном разведении
51:50.
5Рабочая схема РА:
5──────────────────────────────────────────────────────────────
5Ингредиенты │ Ряд пробирок
5│------------------------------------------------
5│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7
5──────────────────────────────────────────────────────────────
51. Физраствор 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 - 0,5
52. Сыворотка 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
5больного 1:50
5Полученные
5титры 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:50 -
53. Диагнос-
5тикум в
5каплях 2 2 2 2 2 - 2
5Инкубация в термостате 2 часа при 370С, затем при
5необходимости 24 часа при комнатной температуре.
5Учет результатов реакции проводят через 24 часа по следующей
5схеме:
5++++ полная агглютинация, жидкость прозрачная, выраженный
5осадок;
5+++ жидкость слегка опалесцирует, но осадок хорошо выражен;
5++ или + сомнительная реакция, жидкость равномерно мутная,
5осадок отсутствует. 0
5- отрицательная реакция, жидкость равномерно мутная,
5осадок отсутствует.
5Титром агглютинирующей сыворотки считается то ее максималь-
5ное разведение, при котором еще происходит реакция не менее,
5чем на три плюса.
5Артефакты:
5- наличие СРБ, агглютинирующего микробы (стафилококки,
Реферат опубликован: 15/06/2005 (23316 прочтено)