Показатели красной крови у новорожденных детей юга и севера

Страница: 4/9

Образовавшийся в печени ПБ вместе с очень небольшой частью НБ выводится с желчью в тонкий кишечник. Здесь от ПБ отщепляется глюкуроновая кислота и происходит его восстановление с последовательным образованием мезобилирубина и мезобилиногена (уробилиногена). Принято считать, что около 10% билирубина восстанавливается до мезобилиногена на пути в тонкий кишечник, т. е. во внепеченочных желчных путях и желчном пузыре. Из тонкого кишечника часть образовавшегося мезобилиногена (уробилиногена) резорбируется через кишечную стенку, попадает в кровяное русло и током крови переносится в печень, где расщепляется полностью до ди- и трипирролов. Таким образом, в норме в общий круг кровообращения и мочу мезобилиноген не попадает (Гаврюшов, 1977).

Основное количество мезобилиногена из тонкого кишечника поступает в толстый кишечник, где восстанавливается до стеркобилиногена при участии анаэробной микрофлоры. Образовавшийся стеркобилиноген в нижних отделах толстого кишечника (в основном в прямой кишке) окисляется до стеркобилина и выделяется с калом.

Определение в клинике содержания ОБ и его фракций, а также уробилиногеновых тел имеет важное значение при дифференциальной диагностике желтух различной этиологии. При гемолитической желтухе гипербилирубинемия возникает в основном в результате образования НБ (Алексеев,1998). Вследствии усиленного гемолиза происходит его интенсивное образование в клетках системы макрофагов из разрушаегося гемоглобина. Печень оказывается неспособной образовать столь большое количество билирубин-глюкуронидов, что приводит к накоплению НБ в крови и тканях (Ленинджер, 1974).

При печеночной желтухе наступает деструкция печеночных клеток, нарушается экскреция ПБ в желчные капилляры и он попадает непосредственно в кровь, содержание его значительно увеличивается. Кроме того, снижается способность печеночных клеток синтезировать билирубин-глюкурониды; вследствии этого количество НБ в сыворотке крови также увеличивается (Березов, 1990).

1.6. Классификация гемолитической болезни

новорожденных

Легкое течение гемолитической болезни новорожденных диагностируют при наличии у ребенка умеренно выраженных клинико - лабораторных или только лабораторных данных. В этом случае требуется лишь консервативная терапия при отсутсвии каких - либо осложнений, тяжелых фоновых состояний и сопутствующих заболеваний. Уровень гемоглобина в пуповинной крови в первые часы жизни более 140 г/л, НБ в пуповинной крови не менее 60 - 85,5 мкмоль/л.

О средней тяжести гемолитической болезни новорожденных свидетельствует гипербилирубинемия, требующая ЗПК , но не сопровождающаяся билирубиновой интоксикацией мозга или развитием других осложнений. В частности, на среднюю тяжесть ГБН указывает желтуха, появившаяся в первые 5 ч жизни при резус - конфликте или первые 11 ч жизни при АВО - конфликте, концентрация Hb в первый час жизни менее 140 г/л, наличие у ребенка с желтухой 3 и более факторов риска билирубиновой интоксикацией мозга. Уровень НБ в пуповинной крови при средней тяжести ГБН - 85,6-136,8 мкмоль\л.

На тяжелое течение ГБН указывает тяжелая анемия (гемоглобин менее 100 г/л) или желтуха (гипербилирубинемия более 136,9 мкмоль/л) при рождении, наличие симптомов билирубинового поражения мозга любой выраженности и во все сроки заболевания, нарушения дыхания и сердечной деятельности при отсутствии данных за сопутствующую пневмо- или кардиопатию, необходимость более 2 заменных переливаний крови, отечная форма болезни (Мидля,1986).

1.7. Клиническая картина гемолитической болезни

новорожденных

Анемическая форма диагностируется у 10 - 20 % больных с ГБН. Дети бледные, несколько вялые, плохо сосут и прибавляют массу тела. У них обнаруживают увеличение размеров печени и селезенки. Уровень НБ обычно нормальный или умеренно повышенный. Признаки анемии обнаруживают в конце 1-й или даже на 2-й неделе жизни (Шабалов, 1996).

Билирубиновая энцефалопатия. В случае недостаточной защиты билирубин накапливается в сером веществе мозга, в особенности в базальных узлах, мозжечке и продолговатом мозге. Такого рода пигментации, называемые ядерной желтухой, являются морфологическим коррелятом тяжелых нарушений деятельности мозга, превращающихся в необратимые повреждения. Воздействие билирубина на другие ткани не столь резко выражено (Берман, 1994). Токсическое влияние билирубина состоит в том, что прекращается образование соединений, богатых энергией АТФ, как последнего звена энергетического метаболизма. Клетки ганглии, лишенные энергии, отмирают, фагоцитируются и наконец заменяются глиозным рубцом.

Было обнаружено, что опасность развития в связи с ГБН ядерной желтухи минимальна в случаях, если уровень билирубина в плазме не превышает 340 мкмоль\л. С нарастанием его концентрации быстро увеличивается вероятность развития ядерной желтухи, однако точно определить границу, представляющую опастность, невозможно (Полачек, 1986).

БЭ клинически редко выявляется в первые 36 часов жизни, и обычно ее первые проявления диагностируют на 3-6 день жизни. Характерны фазы течения: 1) доминирование признаков билирубиновой интоксикации - вялость, снижение мышечного тонуса и аппетита, бедность движений и эмоциональной окраски крика (монотонный крик), неполная выраженность рефлекса Морро (есть только его первая фаза), срыгивания, рвота, “блуждающий” взгляд; 2) появление классических признаков ядерной желтухи - спастичность, ригидность затылочных мышц, вынужденное положение тела с опистонусом, “негнущимися” конечностями и сжатыми в кулак кистями; периодическое возбуждение и резкий “мозговой” крик, выбухание большого родничка, подергивание мышц лица или полная амимия, крупноразмашистый тремор рук, судороги; симптом “заходящего солнца”; исчезновение рефлекса Морро, сосательного рефлекса, остановки дыхания, брадикардия; 3) период ложного благополучия и исчезновения спастичности (начиная со второй недели жизни), когда создается впечатление, что обратное развитие неврологической симптоматики приведет даже к почти полной реабилитации ребенка. Отмечено, что невсегда у новорожденных, особенно недоношенных, с диагностированной на секркции ядерной желтухой клинически были классические ее признаки. Считается, что в первой фазе БЭ поражение мозга в принципе обратимо.

Желтушная форма - наиболее часто диагностируемая форма ГБН. У части детей желтуха имеется уже при рождении (врожденная желтушная форма), у большинства она появляется в первые сутки жизни. Чем раньше появилась желтуха, тем обычно тяжелее течение ГБН. При тяжелых послеродовых формах резус-ГБН желтуха появляется в первые 6-12 ч жизни, а при средней тяжести и легких - во второй половине первых суток жизни. При АВО-ГБН желтуха появляется на 2-3-й день жизни и даже позже. Интенсивность и оттенок желтухи постепенно меняются - вначале апельсиновый оттенок, потом бронзовый, затем лимонный и, наконец, цвет незрелого лимона. Характерны также увеличение печени и селезенки, желтушное прокрашивание склер, слизистых оболочек, нередко наблюдается пастозность живота.

Хотя степень иктеричности кожи и отражает выраженность гипербилирубинемии, но, к сожалению, не всегда. Вместе с тем желтушность ладоней обычно бывает при уровне НБ более 257 мкмоль\л. И все же ориентироваться в оценке выраженности гипербилирубинемии лишь на цвет кожных покровов нельзя. Необходимо определение уровня билирубина в крови биохимическим методом.

Отечная форма - наиболее тяжелое проявление резус-ГБН. При ультразвуковом исследовании плода характерна поза Будды - голова вверху, нижние конечности из-за бочкообразного увеличения живота согнуты в коленях, необычно далеко расположены от туловища; ”ореол” вокруг свода черепа. Уже при рождении у ребенка имеются: резкая бледность и общий отек, особенно выраженный на наружных половых органах, ногах, голове, лице; резко увеличенный в объеме бочкообразный живот; приглушение тонов сердца. Очень часто сразу после рождения развиваются растройства дыхания. Нередок у детей с отечной формой геморрагический синдром (кровоизлияния в мозг, легкие , желудочно-кишечный тракт).

Характерны: гипопротеинемия (уровень белка сыворотки крови падает ниже 40-45 г/л), тяжелая анемия (концентрация гемоглобина менее 100 г/л), разной степени выраженности нормобластоз и эритробластоз, тромбоцитопения. Анемия у таких детей бывает настолько тяжелой, что в сочетании с гипопротеинемией, повреждением сосудистой стенки может привести к сердечной недостаточности. (Шабалов, 1996).

Клиническая картина ГБН по АВО-системе отличается некоторыми отклонениями в развитии, обусловленными поздним появлением и сильно варьирующей интенсивностью гемолитической реакции.

1. Почти никогда гемолитическая анемия более тяжелой формы не развивается у плода и в антенатальном периоде не угрожает ребенку.

2. Желтушная форма развивается только у доношенных новорожденных, у недоношенных лишь в исключительных случаях. Причины гипербилирубинемии у недоношенных обычно другого характера, даже в тех случаях, если сочетание групп матери и ребенка типично.

3. Гемолизу подвергается только часть кровяных телец в кровотоке новорожденного, вследствии чего интенсивность желтухи не достигает такой степени тяжести, какую имеет гипербилирубинемия при резус-изоиммунизации. Кривая билирубина иногда резко поднимается, однако ее подъем обычно раньше останавливается и начинает падать. Тем не менее в некоторых случаях уровень билирубина может быть значительно высоким, и новорожденный подвергается опасности со стороны развития ядерной желтухи. Развитие вторичной анемии в дальнейшем течении болезни наблюдается только исключительно редко.

4. Клиническая картина ГБН, связанной с АВО-несовместимостью, при последующих беременностях не ухудшается (Полачек, 1986).

1.8. Постнатальное лечение гемолитической

болезни новорожденных

Постнатальное лечение ГБН направлено главным образом на предупреждение развития тяжелой гипербилирубинемии и ядерной желтухи. Желтушный синдром вместе с умеренной или среднетяжелой анемией обнаруживается не менее чем у 90% живыми родившихся детей с гемолитической болезнью при резус-несовместимости и оказывается единственной клинической формой АВО-болезни.

1.8.1. Оперативный метод лечения

ЗПК является основным средством борьбы за предотвращение подъема уровня неконъюгированного билирубина до концентрации, угрожающей развитием ядерной желтухи, и является одновременно и оптимальным методом коррекции анемии, если она присутствует. Механизм действия замены крови двоякий:

1. Удаляются кровяные тельца, поврежденные антителами и “обреченные” на распад, а заменяются не связывающимися с антителами матери эритроцитами соответствующего донора..

2. Путем ЗПК удаляется большинство уже образовавшегося неконъюгированного билирубина и снижается тем самым его концентрация в жидкостях тела. Этот механизм имеет решающее значение при повторных переливаниях, когда гемолитическая система крови ребенка уже редуцирована (Полачек, 1986).

Показания к ЗПК. Абсолютным показанием у доношенных детей является гипербилирубинемия выше 342 мкмоль/л, темп нарастания билирубина выше 6,0 мкмоль/л-ч и уровень его в пуповинной крови выше 60 мкмоль/л.

У детей с очень низкой массой при рождении как показанием к ЗПК руководствуются данными: вес менее 1250 - 222 мкмоль/л; вес до 1500 - 257 мкмоль/л; вес до 2000 - 291 мкмоль/л; вес до 2500 кг - 308 мкмоль/л; вес от 2500 и более - 342 мкмоль/л.

При резус-конфликте для ЗПК используют кровь той же группы, что и у ребенка, резус-отрицательную не более 2-3 дней консервации в количестве 170-180 мл/кг (при НБ сыворотке крови более 400 мкмоль/л в объеме 250-300 мл/кг). При АВО-конфликте переливают кровь О(I) с низким титром альфа- и бета-агглютининов, но в количестве 250-400 мл. Если у ребенка имеется одновременно несовместимость по резус- и АВО-антигенам, то обычно ГБН возникает по групповым антигенам, а значит, переливать надо ребенку кровь О(I) группы.

Упомянутый объем крови для ЗПК равен 2 объемам циркулирующей крови (у новорожденных с средним объемом циркулирующей крови - 85 мл/кг массы тела), что обеспечивает при правильном проведении ЗПК замену 85% циркулирующей у ребенка крови (Тимошенко, 1968).

При проведении ЗПК необходимо помнить о следующем: кончик правильно установленного пупочного венозного катетера должен находиться в полой вене между диафрагмой и левым предсердием; длина пупочного венозного катетера от его конца до метки на уровне пупочного кольца равен расстоянию в см. от плеча до пупка - 5 см; начинают процедуру с выведения 30-40 мл (у недоношенных 20 мл) крови ребенка; количество введенной крови должно быть на 50 мл больше выведенной; операция должна проводиться медленно 3-4 мл в 1 мин чередованием выведения и введения по 20 мл крови (у недоношенных 10 мл) с длительностью всей операции не менее 2 ч, на каждые 100мл введенной крови надо ввести 1 мл 10% раствора кальция глюконата. В сыворотке крови ребенка до ЗПК и сразу после него определяют уровень билирубина.

При врожденной отечной форме ГБН необходимо немедленно (в течение 5-10 сек) пережать пуповину, ибо отсрочка может стимулировать развитие гиперволемии (Халл, 1983). Температурная защита. Срочное начало ЗПК. Сердечной недостаточности при рождении нет, но она легко развивается после рождения. Поэтому вначале эритроцитную массу переливают лишь в объеме 10 мл, а при проведении первого ЗПК его общий объем иногда снижают до 75-80 мл/кг или если проводят ЗПК в полном объеме, то выпускают крови на 50 мл больше, чем вводят. Развитие сердечной недостаточности - назначение дигоксина (доза насыщения 0,03 мг/кг дается за 2-3 дня). На 2-3-й день жизни назначают фуросемид. После ЗПК начинают инфузионную терапию по общим правилам.

1.8.2. Консервативные методы лечения

Фототерапия в настоящее время наиболее широко используемый метод консервативного лечения желтух новорожденных с НБ в крови. Обычно источник света распологают на 45-50 см над ребенком и облучение должно быть не меньшим, чем 5-6 мкВт/см2/нм. Обычно фототерапию начинают при величинах НБ в сыворотке крови, на 85-100 мкмоль/л. Доношенным новорожденным фототерапию начинают при уровне НБ в крови 205 мкмоль/л и более, а недоношенным - 171 мкмоль/л и более. У детей с очень низкой массой тела при рождении фототерапию начинают при уровне НБ в сыворотке крови 100-150 мкмоль/л.

Положительный эффект фототерапии заключается в увеличении экскреции билирубина из организма со стулом и мочой, уменьшение токсичности НБ и риска ядерной желтухи при высоких непрямых гипербилирубинемиях. Считают, что это связано с фотоокислением НБ с образованием биливердина, дипирролов или монопирролов, которые водорастворимы и выводятся из организма с мочой. Продолжительность фототерапии - 72-96 ч, но она может быть и меньшей, если уровень НБ достиг физиологических для ребенка соответствующего возраста величин (Гаврюшов, 1977).

Эффективность фототерапии повышается при сочетании ее с инфузионной, ибо стимуляция диуреза ускоряет выведение водорастворимых фотоизомеров билирубина. В первый день жизни обычно вливают 50-60 мл/кг 5% раствора глюкозы, далее добавляя по 20 мл/кг ежедневно, доводя к 5-му дню объем до 150 мл/кг.

Со вторых суток жизни на каждые 100 мл 5% раствора глюкозы добавляем 1 мл 10% раствора кальция глюконата, 13 мл изотонического раствора натрия хлорида и 1 мл 7% раствора калия хлорида. Скорость вливания 3-4 капли в минуту.

Фототерапия - единственный метод консервативного лечения гипербилирубинемий, эффективность которого общепризнана. Из других методов лечения рассматривают:

Фенобарбитал, назначенный после рождения, способствует активации образования билирубина диглюкуронида и улучшению оттока желчи, а значит, и уменьшению интенсивности желтухи (Шабалов, 1986).

1.9. Влияние климатических и экологических факторов

севера на репродуктивную функцию женщин и

здоровье детей

Интенсивное промышленное освоение районов проживания народностей Севера накладывает глубокий отпечаток на жизнедеятельность коренного населения, вызывая адаптивную перестройку организма на всех уровнях (физиологическом, морфологическом, биохимическом, иммунологическом) (Казначеев, 1983).

Освоение газоконденсатных месторождений на территории Ямальского и Надымского районов Ямало-Ненецкого автономного округа связано с исключением значительных площадей из традиционного природопользования. Это является одним из важных звеньев проблемной ситуации, изменяющей образ жизни коренного населения Тюменского севера и формирующей состояние его здоровья (Мефодьев, 1998).

Разработка нефтегазовых месторождений в отдельных регионах России прямым и косвенным образом влияет на состояние здоровья различных этнических групп населения, коренных и пришлых популяций. Факторы окружающей среды могут воздействовать на различные ступени репродуктивного процесса, приводить к повышенному риску аборта, врожденных пороков, задержке роста плода, перинатальной смертности (Казначеев, 1980).

Одним из важных критериев состояния здоровья населения является уровень материнской смертности. В Ямало-Ненецком автономном округе он довольновысок - 120 случаев на 100 000 живорожденных, а по области - 108 (почти в 2 раза выше, чем в Российской Федерации, где он составляет 52,3). Смертность женщин коренного населения высокая - в 36,8 раза выше, чем по Российской Федерации. По структуре причин материнская смертность среди коренного населения не отличается от таковой в России и обусловлена прежде всего кровотечением при родах, гестозами беременных, сепсисом.

Особое значение придается перинатальной и младенческой смертности. Под перинатальной смертностью понимается отношение числа родившихся мертвыми и умерших на первой неделе жизни к общему числу родившихся (живыми и мертвыми), умноженное на1000. Увеличение уровня перинатальной смертности с изменением ее структуры целесообразно учитывать при выявлении экологически неблагополучных территорий. Показатель младенческой смертности характеризует смертность детей от рождения до одного года жизни и складывается из показателей неонатальной (0 - 27дней) и постнеонатальной (28 - 365 дней) смертности.

Высокий уровень младенческой смертности в значительной степени обусловлен летальностью от состояний, возникающих в перинатальном периоде, врожденных аномалий, т. е. от заболеваний, тесно связанных со здоровьем матери. Умершие от этих причин состовляют в России ежегодно две трети общего числа погибших на первом году жизни. Величина перинатальной смертности зависит от биологических, социально-экономических, экологических факторов (Казначеев, 1985).

Крайне высокие показатели постнеонатальной смертности отмечены в Приуральском (27,8), Тазовском (18,5), Шурышкарском (14,0), Ямальском (21,9%) районах, где значителен удельный вес детей коренной национальности. Показатели младенческой и перинатальной смертности в 1994 г. в указанных районах превышали в 1,5 - 3 раза аналогичные показатели в Российской Федерации, состовлявшие 18,6 - 17,1 на 1000 родившихся.

В структуре причин младенческой смертности среди коренного населения на первом месте стоят болезни органов дыхания, на втором - несчастные случаи, на третьем - болезни новорожденных. Ситуация обусловлена рядом обстоятельств: суровый климат, труднодоступность медицинской помощи, поздняя обращаемость за медицинской помощью, отсутствие рации в ряде бригад оленеводов и охотников,недостаточная обеспеченность транспортом, неполная укомплектованность квалифицированными медицинскими кадрами. Следует отметить, что врожденные аномалии среди новорожденных как пришлого, так и коренного населения особенно часто наблюдались в городах Салехарде, Новом Уренгое, Надымском районе.

Значительный удельный вес в структуре патологии перинатального периода занимали внутриутробные гипотрофии, физиологическая незрелость. Увеличение числа маловесных детей указывает на ряд причин, связанных с патологией матерей, а также с воздействием неблагоприятных факторов внешней Среды.

Высокой остается смертность детей, особенно в возрасте до одного года, проживающих в тундре. В структуре причин смерти отмечаются несчастные случаи, заболевания органов дыхания, инфекционные и паразитарные болезни (Мефодьев, 1998).

II. материалы и методы исследований

2.1. Материалы исследований

Все новорожденные были разделены на три группы: новорожденные с ГА по АВО-системе, новорожденные с ГА по Rh-фактору и новорожденные с ГА по АВО-системе и Rh-фактору одновременно.

В первую группу вошло 20 детей, во вторую - 69 детей, в третью - 27 детей.

Кроме того, новорожденные второй группы были разделены на две подгруппы по типу применяемого лечения: в первую группу вошли дети, пролеченные оперативным путем (n = 30), во вторую группу - пролеченные консервативным путем (n = 39).

Так же, было проанализировано течение заболевания у детей рожденных от матерей, приехавших с юга и севера Тюменской области.

У больных детей брали кровь для исследования тяжести течения ГА при рождении, в пик заболевания и при выписке из стационара.

Нами были исследованы следующие показатели крови:

1. Определение количества Нb;

2. Определение общего объема эритроцитов (Ht);

3. Определение количества эритроцитов;

4. Определение количества общего билирубина;

5. Определение количества прямого билирубина;

6. Определение количества непрямого билирубина.


2.2. Определение количества гемоглобина

Унифицированный гемоглобинцианидный метод (1974).

Гемоглобин окисляют в метгемоглобин железосинеродистым калием (красная кровавая соль); образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметром.

Реактивы:

1. Трансформирующий раствор;

2. Калибровочный раствор гемиглобинцианида.

Можно использовать стандартный раствор фирмы “Имуна” с концентрацией гемиглобинцианида 61,23 мг / 100 мл и фирмы “Реанал” с концентрацией вещества 59,75 мг / 100 мл. Это соответствует концентрации гемоглобина в крови 15,4 г / 100 мл и 15 г / 100 мл при разведении ее в 251 раз. Стандартные растворы хранят в холодильнике (в незамороженном виде) в защищенном от света месте (Кост, 1975).

Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр (ФЭК - 56 М). В пробирку к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл крови (разведение в 251 раз). Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют стоять на 10 мин. Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Измеряют при тех же условиях стандартный раствор.

Расчет содержания гемоглобина производят по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору гемоглобинцианида, или по формуле:

Hb (г %) = Еопт · С · К · 0,001, где

Ест

Еопт - зкстинкция опытной пробы;

Ест - экстинкция стандартного раствора;

С - концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе, мг %;

К - коэффициент разведения крови;

0,001 - коэффициент для подсчета мг / 100 мл в г / 100 мл.

2.3. Определение общего объема эритроцитов (гематокрита)

Определение гематокрита с помощью микроцентрифуги (1979). Принцип. Центрифугирование крови определенное время при постоянном числе оборотов центрифуги с последующим определением результата по специальной шкале.

Реактивы. Антикоагулянты: гепарин - 5000 ЕД/мл разводят дистиллированной водой в соотношении 1 : 5 или этилендиаминтетрауксусной кислоты динатревая соль (ЭДТА Na2, трилон Б), 40 г / л.

Оборудование:

1. Микроцентрифуга МЦГ - 8;

2. Капиллярные трубки (в комплекте с центрифугой). Можно использовать капиляры для определения С - реактивного белка.

Ход определения. Предварительно обработанный антикоагулянтом и высушенный капилляр заполняют кровью из пальца на 7/ 8 длины. Укупоривают капилляр с одного конца специальной пастой. Помещают в ротор центрифуги так, чтобы укупоренные концы упирались в резиновую прокладку, и центрифугируют 5 мин при 8000 об /мин. По отсчетной шкале, приложенной к центрифуге МЦГ - 8, определяют гематокритную величину.

2.4. Определение количества эритроцитов

Унифицированный метод подсчета в счетной камере (1972). Принцип. Подсчет эритроцитов под микроскопом в определенном количистве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мл крови, исходя из объема квадратов и разведения крови.

Реактивы. 0,9 % раствор хлорида натрия или раствор Гайема. Специальное оборудование:

1. Счетная камера Горяева;

2. Микроскоп.

Разводят исследуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую пробирку отмеривают 4 мл реактива 1 или 2. Пипеткой набирают 0,02 мл крови. Кончик пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей и кровь выдувают на дно пробирки, пипетку тщательно промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять до момента счета.

Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и покровное стекло, затем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая на стекло таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это свидетельствует о требуемой высоте камеры - 0,1 мм).

Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько раз тщательно встряхивают содержимое пробирки, затем стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно без пузырьков воздуха заполнила всю поверхность камеры с сеткой, не затекая в бороздки. Заполненую камеру оставляют в горизонтальном положении 1 мин (для оседания эритроцитов).

Для подсчета эритроцитов, не меняя горизонтального положения камеры, помещают ее на столик микроскопа (объектив 8 х, окуляр 10 х) находят верхний левый край сетки. Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах.

Рекомендуется считать клетки в квадратах сетки, расположенных по диагонали. Для того чтобы одни и те же эритроциты, лежащие на линиях, не попали дважды в счет, принято для каждого квадрата считать расположенные на определенных двух линиях.

Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят, исходя из разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (80) и объема 1 малого квадрата ( 1 мкл), по следующей формуле:

4000

Х = а · 4000 · 200 , где

80

Х - число эритроцитов в 1 мкл крови;

а - число сосчитанных эритроцитов.

В результате сокращения Х = а · 10000 (Меньшиков, 1987).

2.5. Определение общего билирубина

Метод Ендрасика - Грофа (1972). Принцип. Под воздействием HCI разрывается тетрапироловая связь билирубина и образуются два дипиррола, которые диазотируются диазобензосульфоновой кислотой с образованием розового-фиолетового азобилирубина. Связанный билирубин реагирует быстро, несвязанный билирубин реагирует после добавления кофеинового реактива.

Реактивы: 1. Кофеиновый реактив 1,75 мл;

2. Диазосмесь 0,25 мл;

3. Сыворотка 0,5 мл.

В две пробирки (одна опытная и одна холостая) вводят сыворотку и реактивы. Для холостой пробы требуется: 0,5 мл сыворотки, 1,75 мл кофеинового реактива и 0,25 мл раствора хлорида натрия. Для определения общего билирубина пробу оставляют стоять 20 мин, после чего измеряют на фотометре. При дальнейшем стоянии краска не изменяется. Измерение проводят при длине волны 500-560 нм в кювете с толщиной слоя 0,5 см против воды. Из показателя общего билирубина вычитают показатель холостой пробы. Расчет производят по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика. Калибровочный график строится по готовому набору реактивов “Билирубин-эталон” (“Лахема”). Набор Био-Ла-Тест “Билирубин-эталон” включает:

1.Билирубин лиофилизированный;

2. Альбумин лиофилизированный;

3. Калибровочная линейка до 170 мкмоль/л.

2.6. Определение прямого билирубина

Реактивы: 1. Сыворотка 0,5 мл;

2. Раствор хлорида натрия 1,75 мл;

3. Диазосмесь 0,25 мл.

В две пробирки (одна опытная и одна холостая) вводят реактивы. Для определения связанного билирубина измерение проводят спустя 5-10 мин после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает несвязанный билирубин.

Измерение проводят при длине волны 500 - 560 нм в кювете с толщиной слоя 0,5 см против воды. Из показателей, полученных при измерении связанного билирубина, вычитают показатель холостой пробы. Расчет производят по калибровочному графику.


2.7. Определение непрямого билирубина

В сыворотке крови на долю непрямого билирубина приходится 75%. Исходя из этого, находим НБ по формуле:

НБ = ОБ - ПБ.

2.8. Методы статистической обработки результатов

Полученные данные были обработаны статистически (Лакин, 1980). Применялся параметрический метод вариационной статистики.

1. Нахождение среднего арифметического значения членов совокупности (М) и среднего квадратичного оклонения (m) велось по формуле:

М = å ; s = ± Ö S • a2

n n - 1 ,

где S - сумма вариант;

n - число вариант;

s - среднее квадратичное отклонение.

2. Определение m - средней квадратичной ошибки:

m = ± s

Ö n

3. Определение критерия достоверности (t) велось по Стьюденту:

t = М1 - М2

Ö m12 + m22

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Сравнительная характеристика показателей периферической крови у новорожденных с ГА по АВО-системе, пролеченных консервативным путем

Как видно из таблицы 1, при ГА новорожденных по АВО-системе, среднее количество эритроцитов и ПБ существенно не изменялось до и после лечения и составляли: эритроциты 4,4 ± 0,16 · 1012 л и 4,3 ± 0,12 · 1012 л, ПБ 14,19 ± 4,68 · 1012 л и 9,00 ± 2,40 · 1012 л. В пик заболевания повышение ПБ не наблюдалось.

При консервативном лечении новорожденных с ГА по АВО-системе происходило стабильное достоверное (р<0,05) снижение Hb при рождении, в пик заболевания и при выписке 189,39 ± 5,54 г/л, 183,50 ± 5,29 г/л и 169,45 ± 5,07 г/л соответственно. По аналогии, мы наблюдали достоверное (р<0,01) снижение Ht с 59,29 ± 1,97 % до 51,45 ± 1,59 %.

Напротив, в пик заболевания наблюдалось незначительное повышение ОБ с 187,05 ± 15,93 мкмоль/л до 213,95 ± 13,06 мкмоль/л, а при выписке резкое достоверное (р<0,001) снижение этого параметра до136,60 ± 8,15 мкмоль/л.

По показателю НБ мы наблюдали небольшой подъем к середине заболевания с 172,25 ± 15,68 мкмоль/л до 199,25 ± 11,77 мкмоль/л. В результате лечения эти цифры достоверно (р<0,001) снизились до 126,80 ± 8,12 мкмоль/л.

Таблица 1

Показатели периферической красной крови у детей с ГБН

по АВО-системе (n = 20)

Период

заболевания

Показатели

I

II

III

Hb, г/л

189,39 ± 5,54

183,50 ± 5,29

DD

169,45 ± 5,07

DDD, *(II,III)

Ht, %

59,29 ± 1,97

55,09 ± 1,76

DD

51,45 ± 1,59

DDD, **(I,III)

Эритроциты, 1012л

4,44 ± 0,16

-

4,30 ± 0,12

DD

ОБ,мкмоль/л

187,05 ± 15,93

DDD

213,95 ± 13,06

136,60 ± 8,15

DD, ***(II,III), **(I,III)

ПБ,мкмоль/л

14,19 ± 4,68

12,44 ± 3,73

9,00 ± 2,40

НБ,мкмоль/л

172,25 ± 15,68

DDD

199,25 ± 11,77

126,80 ± 8,12

DDD, ***(II,III), *(I,III)

Реферат опубликован: 1/06/2005 (17673 прочтено)